特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 產(chǎn)品名稱 | 巴氏*線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Nematodirus battus | 貨號 | YSP96998 |
熒光染料的優(yōu)點(diǎn): 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點(diǎn): 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識別,進(jìn)而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來說,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 ? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán),3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。 正常情況下兩個基團(tuán)的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn): 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn): 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 PCR技術(shù)的定量原理: 擴(kuò)增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 大鼠醛固酮(ALD)ELISA試劑盒英文名稱:rat aldosterone,ALD ELISA Kit* 大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒英文名稱:Rat heat shock protein 20,hSP-20 ELISA Kit進(jìn)口/原裝 大鼠熱休克蛋白27(HSP-27)ELISA試劑盒英文名稱:Rat heat shock protein 27,HSP-27 ELISA Kit進(jìn)口/原裝 大鼠熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒英文名稱:Rat heat shock protein 40,hSP-40 ELISA Kit進(jìn)口/分裝 大鼠熱休克蛋白47(HSP47)ELISA試劑盒英文名稱:Rat heat shock protein,HSP47 ELISA Kit進(jìn)口/分裝 GPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7) 脂?;嫉鞍拙厶?3(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg MMP8 MMP-8 兔單抗 (PE) Human C17orf59 英文名稱: 17號染色體開放閱讀框59抗體 0.2ml Anti-factor XIII 凝血因子13抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml rat adiponectin 大鼠脂聯(lián)素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-DAPK3 凋亡相關(guān)蛋白激酶3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh NDUFAF4 激素調(diào)節(jié)增值細(xì)胞相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml Human plaet-derived growth factor,PDGF ELISA Kit 人血小板衍生生長因子 96T Serine racemase 英文名稱: 絲酸消旋酶 0.2ml 活化的Caspase-3 單克隆抗體Active Caspase-3 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 酸化絲氨酸 單克隆抗體Phosphoserine Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 牛血清白蛋白 單克隆抗體Bovine Serum Albumin Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul ?;嚢彼?單克隆抗體Acetyl Lysine Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 熱休克蛋白27 單克隆抗體HSP27 Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul c-Fos 單克隆抗體c-Fos Monoclonal Antibody700/30ul#1540/100ul#2520/200ul 巴氏*線蟲探針法熒光PCR檢測試劑盒豬瘟病毒包膜糖蛋白E2抗體tsg101/FITC 熒光素標(biāo)記tsg101抗體IgG500 ul 冷休克結(jié)構(gòu)域蛋白C2抗體TSH/FITC 熒光素標(biāo)記抗促甲狀腺素單克隆抗體IgG100µl 碳酸酐酶10抗體TSHR/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素受體抗體IgG500 ul L選擇素抗體TSHR(CT)/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素受體抗體(C端)IgG100µl 致癌基因C-Myc抗體TSHR /FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素受體抗體IgG500 ul 膽囊收縮素8抗體TSHR(NT)/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素受體抗體(N端)IgG500 ul 上皮鈣粘附分子抗體TSH/FITC 熒光素標(biāo)記促甲狀腺素抗體IgG100 ul 結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CID1抗體TSH/Biotin 生物素化促甲狀腺素抗體IgG100 ul Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體TSLC1/FITC 熒光素標(biāo)記肺癌腫瘤阻抑基因1抗體IgG20 ul |