PCR技術(shù)的定量原理: 擴增曲線 在Real- qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。 在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。 熒光染料的優(yōu)點: 產(chǎn)品僅用于科研使用簡便; 可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合; 價格便宜; 熒光染料的缺點: 不能區(qū)分不同的雙鏈DNA 引物二聚體會影響檢測的敏感性 非特異性產(chǎn)物會影響結(jié)果的敏感性 引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別,進而通過PCR引物的設(shè)計和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決??偟膩碚f,SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實驗手段。 產(chǎn)品名稱 | 鼠痘病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Mouse Pox Virus(MPV) | 貨號 | YSP96934 |
? 熒光探針: Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針,其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計合成一個能夠與之特異性雜交的探針,該探針的5'端標記熒光基團,3'端標記淬滅基團。 正常情況下兩個基團的空間距離很近,熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時,引物與該探針同時結(jié)合到模板上,探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。 當擴增延伸到探針結(jié)合的位置時,Taq酶利用5'外切酶活性,將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來,從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比,因此,根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數(shù)量。 TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結(jié)合的問題,反應(yīng)結(jié)束后無需通過熔解曲線檢測,縮短了實驗時間。 TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點: 熒光背景低; 敏感性高; 雜交穩(wěn)定性高; 熒光光譜分辨率好; 特異性高。 TaqMan探針技術(shù)的缺點: 成本高; 設(shè)計難度大; 只能用于檢測產(chǎn)物長度低于150bp的反應(yīng)。 由于TaqMan探針的高特異性,可用于等位基因的辨別,特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。 ? 熒光定量PCR原理: 產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。 一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! ABLIM1 英文名稱: 肌動蛋白結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml Anti-CD158i/KIR2DS4/FITC 熒光素標記NK細胞抑制性受體2DS4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml IL-5 ELISA Kit 大鼠白介素5Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-AIF/FITC 熒光素標記調(diào)亡誘導因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml Rhesus antibody Rh FBXO11 F-box蛋白相關(guān)蛋白11抗體 規(guī)格 0.2ml HBeAb(Mouse hepatitis B virus e antibody) ELISA Kit 小鼠型肝炎e抗體 96T MND1 英文名稱: 減數(shù)分裂核分裂蛋白1抗體 0.2ml BTB domain containing 5 英文名稱: 鋅指蛋白47抗體 0.2ml Anti-PRL1/PTP4A1 肝再生酸酯酶1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml CDK-7(Human Cyclin-dependent kinase 7) ELISA Kit 人周期素依賴性激酶7Multi-class antibodies規(guī)格: 48T Anti-MRP4/ABCC4 多藥耐藥相關(guān)蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml Rhesus antibody Rh Integrin alpha 4+Beta 7 整合素α4β7抗體 規(guī)格 0.1ml PEA(Human Pseudomonas Exotoxin A) ELISA Kit 人綠膿桿菌外毒素A 96T PAX2 英文名稱: 配對盒基因2抗體 0.1ml 霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基配套平皿9㎝/塊Mould And Yeast Chromogenic Medium Dish 阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基1升Enterobacter Sakazakii Chromogenic Medium用于坂崎桿菌的顯色培養(yǎng),坂崎桿菌顯藍色,其他腸桿菌顯無色 250克 維生素B12測定用培養(yǎng)基250克Vitamin B12 Assay Broth嬰兒食品和乳粉中維生素B12測定 支原體瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基250克Mycoplasma Agar Base用于支原體的分離培養(yǎng) 支原體肉湯培養(yǎng)基250克Mycoplasma Broth用于培養(yǎng)支原體的基礎(chǔ)培養(yǎng)基 鼠痘病毒探針法熒光PCR檢測試劑盒卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白102B抗體PEPT1/FITC 熒光素標記腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白1/小肽轉(zhuǎn)運蛋白1抗體IgG100 ul 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白16抗體PEPT2 /FITC 熒光素標記腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白2/小肽轉(zhuǎn)運蛋白2抗體IgG100 ul 細胞色素B還原酶1抗體PERK/FITC 熒光素標記蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體IgG20 ul 2號染色體開放閱讀框76抗體Phospho-PERK (Thr980)/FITC 熒光素標記酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體IgG100 ul 3號染色體開放閱讀框19抗體peripherin/FITC 熒光素標記外周蛋白抗體IgG100 ul 細胞色素c氧化酶5A抗體HSP-27/HRP 辣根過氧化物酶標記熱休克蛋白27抗體IgG100 ul 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白60抗體P-fscn1/FITC 熒光素標記酸化纖維束蛋白同源物1/肌動蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗體IgG100 ul 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白144A抗體PG-C/FITC 熒光素標記胃蛋白酶原C抗體IgG100 ul 周期素B3抗體PGC-1 Alpha/FITC 熒光素標記過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗體IgG100 ul |