實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則：

1、洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。

2、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。

3、底物有一定的毒性，終止液對(duì)皮膚有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸。

4、檢測(cè)前，要打開酶標(biāo)儀，使之穩(wěn)定10分鐘以上。

5、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。

7、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板，防止水分的蒸發(fā)。

8、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應(yīng)靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機(jī)時(shí)，倒去液體后，要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。

9、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
10、底物是光敏感的，要在臨用前現(xiàn)配。

儀器：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀（比色測(cè)定波長(zhǎng)為550nm）

2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）

3、臺(tái)式離心機(jī)

4、漩渦混勻器

5、微量移液器

樣本收集與前處理：

血清（漿）可直接測(cè)定。

紅細(xì)胞：需按照試劑盒中說明書上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。

動(dòng)物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測(cè)定。

培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。

具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說明書。

生化法檢測(cè)試劑盒：分光光度法、微量法、比色法、酶標(biāo)法、高液相色譜法，自主，技術(shù)團(tuán)隊(duì)，操作簡(jiǎn)便快捷，規(guī)格合理、系列成套，價(jià)格合理，是廣大科研工作者的好選擇，詳細(xì)產(chǎn)品咨詢：

測(cè)定步驟：

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準(zhǔn)確

3.管底加樣，不能加在管壁上

4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡

2.溫

1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。

2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。

3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便 不時(shí)觀察，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng)。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。

2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

4.讀板

1.陰性對(duì)照顏色極淺，在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。

2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。

乙二四乙二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.05000mol/L (0.05M錯(cuò)配修復(fù)蛋白2抗體CK5+6  角蛋白5+6抗體

乙二四乙二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.02000mol/L (0.02M)5胞嘧啶抗體CK42  角蛋白42

乙二四乙二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.01000mol/L (0.01M)T淋巴分化蛋白MAL2抗體CK4  角蛋白4抗體

金標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml環(huán)指蛋白61抗體CK3  角蛋白3抗體

金標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml蕈堿型乙酰膽堿受體M3抗體CK20  角蛋白20抗體

鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.000mol/L(1N)錯(cuò)配修復(fù)蛋白1抗體CK2  角蛋白2抗體

鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.5000mol/L(0.5N)血管緊張素Ⅱ2型受體相互作用蛋白抗體CK19/CK17/CK14/CK10/CK42  角蛋白19，17，14，42，10抗體

鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.2000mol/L(0.2N)巨噬清道夫受體抗體CK19  角蛋白19抗體

鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1000mol/L(0.1N)生肌調(diào)節(jié)因子6抗體CK18  角蛋白18抗體（C端）

鹽溶液 6mol/L(6N)化CpG結(jié)合蛋白抗體CK18  角蛋白18抗體

鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μ/ml單克隆抗體CK17/Cytokeratin 17  角蛋白17抗體

鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μ/ml單克隆抗體CK16  角蛋白16抗體

標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.05000mol/L (0.1N)GTP結(jié)合蛋白MAS1抗體CK15  角蛋白15抗體

鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000mg/L，溶劑：1%硝髓鞘相關(guān)糖蛋白-a抗體CK15  角蛋白15抗體

鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml黑色素瘤相關(guān)抗原抗體CK14/17/42/10  角蛋白14抗體
環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量測(cè)試盒轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β3抗體（TGFβ3）膽甾烷 CHOLESTAN-3-b-OL, (5a)-(AS)Human, Mouse, Rat

轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β受體2抗體（TGF-βRⅡ，TGFβRⅡ）膽甾烷 CHOLESTAN-3-b-OL, (5a)-(AS)Human, Mouse

轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β受體1抗體膽甾烷 CHOLESTAN-3-b-OL, (5a)-(AS)Human, Mouse, Rat

狀腺過氧化物酶抗體膽甾烷 CHOLESTANE, (5a-)-(P)Human

腫瘤壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體膽甾烷 CHOLESTANE, (5a-)-(P)Human

生精凋亡相關(guān)因3抗體膽甾烷 CHOLESTANE, 5-ALPHA-(RG)Human

三狀腺素T3抗體膽甾烷 CHOLESTANE, 5-ALPHA-(RG)Human, Mouse

按蚊硫酯包含蛋白-1抗體膽甾烷 CHOLESTANE, 5-ALPHA-(RG)Human, Mouse, Rat

端粒酶結(jié)合蛋白P23抗體喹那多/5,7-二-8-羥喹哪啶 CHLORQUINALDOL(RG)Human, Mouse

法尼二合酶1抗體ProADM (Adrenomedullin)-N20 peptide /FITC  熒光素標(biāo)記腎上腺髓質(zhì)素前提N端20肽抗體IgG

鳥嘌呤核苷結(jié)合蛋白1抗體pro-caspase3/FITC  熒光素標(biāo)記半胱天冬酶-3酶原抗體IgG