|
|
 |
|
| 流式細胞術檢測人和小鼠Th細胞亞群 |
|
| 點擊次數(shù)：2402 更新時間：2010-11-08 |
| |
早在1986年Mosmann等[1]依據(jù)小鼠分泌的細胞因子譜不同將Th細胞分為Th1和Th2兩個功能不同的獨立亞群。Th1細胞主要分泌IL-2、、IL-12、IFN-γ和TNF- α等細胞因子，介導與細胞毒和局部炎癥有關的免疫應答，參與細胞免疫及遲發(fā)型超敏反應。Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、 IL-6、IL-10和IL13等細胞因子，其主要功能為刺激B細胞增殖并產(chǎn)生抗體，與體液免疫相關。由于Th1/Th2 亞群及其相互之間的平衡在免疫應答的調(diào)節(jié)中起著關鍵的作用，Th1/Th2 平衡的失調(diào)與多種疾病的發(fā)生發(fā)展和預后有著密切的關系。目前已發(fā)現(xiàn)許多感染性疾病、自身免疫性疾病、過敏性疾病以及移植排斥反應等都與Th1/Th2 平衡有關。因此建立穩(wěn)定有效的細胞內(nèi)因子檢測方法對于準確說明Th1/Th2細胞的作用非常重要。目前檢測的主要方法有酶聯(lián)免疫法、ELISPOT法、熒光定量法及原位雜交等方法。流式細胞術檢測細胞內(nèi)因子是一種相對快速、重復性好并能準確定量的方法。我們參照國內(nèi)外的一些文獻，對于人和小鼠Th1和Th2細胞的流式檢測方法進行了探索，并比較了兩者之間的不同。
材料與方法
試劑
PMA（Sigma）
貯存液：PMA 溶于DMSO 濃度為0.1mg/ml -20℃ 保存。
工作液：貯存液1:100 稀釋于RPMI 1640培養(yǎng)基中，此時為1µg/ml。
Ionomycin（Sigma）
貯存液：Ionomycin 溶于DMSO 濃度為1mg/ml -20℃ 保存。
工作液：貯存液1:20 稀釋于RPMI 1640 培養(yǎng)基中，此時為50µg/ml。
GolgiStop（內(nèi)含Monensin ，BD Pharmingen）
Cytofix/Cytoperm液、Perm/Wash液和FACS Lysing Solution，均購自BD Pharmingen。
抗體
細胞表面標記抗體：抗人CD3-APC，CD8-PercP，CD8-CYC，CD4-CYC?？剐∈驝D4-CYC、CD8PE。
細胞內(nèi)因子抗體：抗人IL-4-PE, IFN-γ-FITC?？故驣L-4-PE, IFN-γ-FITC。以上抗體均購自BD Pharmingen。
|
|
| |
|
|
